監(jiān)護(hù)儀廠家：影響血細(xì)胞分析儀準(zhǔn)確性的因素探討

一、標(biāo)本處理方法對結(jié)果的影響

1、采血部分

血液分析一般要求用抗凝的靜脈血，盡可能不用末梢皮膚穿刺采血。因為不同部位皮膚穿刺血的細(xì)胞成分及細(xì)胞與血漿的比例常不一致，與靜脈血的差別更大 。從技術(shù)角度講，毛細(xì)血管采血量較少，全自動的血液分析儀需血量較大，不易采到足夠量，更不能在需要的時候進(jìn)行重復(fù)檢查，因此除了少數(shù)不易取靜脈血如嬰兒、大面積燒傷的病人及某些需要經(jīng)常采血檢查的病例，如白血病、腫瘤放療或化療病人外，均應(yīng)采用靜脈血檢測。

2、容器的選擇

存放抗凝血的容器應(yīng)盡量采用密閉式的，以防止水分蒸發(fā)或環(huán)境污染等方面的影響。為了減少對血小板分析的影響，應(yīng)使用塑料試管，采血后應(yīng)立即混勻。如果采用玻璃制品應(yīng)首先對容器進(jìn)行硅化處理，以防止血小板黏附，造成血小板計數(shù)的減少。目前在發(fā)達(dá)國家普遍使用真空采血系統(tǒng)，這一系統(tǒng)使標(biāo)本在采血和測試期間完全與外界隔離，避免空氣或異物污染血液，也防止發(fā)生溶血，提高檢測準(zhǔn)確性，同時也防止采血及檢驗人員因直接接觸血液而受到感染的危險。

3、抗凝劑

國際血液標(biāo)準(zhǔn)化委員會（ISCH）推薦使用的抗凝劑是EDTA二鉀，含量規(guī)定為1.5-2.2mg/ml血。此抗凝劑不影響白細(xì)胞計數(shù)及大小，對紅細(xì)胞形態(tài)影響也最小，并且可以抑制血小板的聚集。EDTA二鈉用于血常規(guī)檢查與EDTA二鉀抗凝血的結(jié)果相比無明顯變化，但其溶解度較低，抗凝速度慢，不適合末梢血的抗凝。

需要注意的是EDTA二鉀可以使紅細(xì)胞體積輕度膨脹，采血后短時間內(nèi)MPV非常不穩(wěn)定，半小時后方趨于平穩(wěn)。枸櫞酸鹽類抗凝劑對MPV及其他凝血因子影響極小，可用于血小板的分析。

4、稀釋標(biāo)本

在使用半自動血液分析儀時，血液需要經(jīng)過預(yù)稀釋以后方能檢驗，應(yīng)特別注意稀釋溶血現(xiàn)象。稀釋溶血是指血液經(jīng)高倍稀釋后，隨著放置時間的延長血細(xì)胞自行溶解的現(xiàn)象。所以血液稀釋后應(yīng)盡快測定，以避少數(shù)量的減低。

5、溶血標(biāo)本對分析結(jié)果的影響

由于標(biāo)本的處理不當(dāng)，例如采血不順利、劇烈震蕩等，可以造成標(biāo)本試管內(nèi)溶血。溶血嚴(yán)重的標(biāo)本可以使紅細(xì)胞和血球壓積下降、血紅蛋白相對增加，導(dǎo)致MCH和MCHC增高，而平均紅細(xì)胞體積正常。這一結(jié)果可以使臨床醫(yī)生作用錯誤的判斷，造成不良后果。所以對于溶血的標(biāo)本，應(yīng)重新采集標(biāo)本后測定。

6、存放時間對結(jié)果的影響

抗凝全血在室溫的條件下進(jìn)行儀器測定，紅細(xì)胞、白細(xì)胞和血小板各項指標(biāo)可以穩(wěn)定24個小時，白細(xì)胞分類可穩(wěn)定6-8小時，血紅蛋白可穩(wěn)定數(shù)日。但如果在顯微鏡下進(jìn)行白細(xì)胞分類，兩小時后粒細(xì)胞形態(tài)即有變化，所以如果需要做顯微鏡形態(tài)學(xué)檢查，應(yīng)及早推制血片。雖然4攝氏度條件可延長血液儲存期，但血小板不宜在低溫下儲存，會影響計數(shù)和體積，因此如不能及時檢測血液應(yīng)在室溫下保存。

很多文獻(xiàn)報道EDTA鹽抗凝的靜脈血，在采血后的一小時內(nèi)檢測MPV不穩(wěn)定，血小板體積逐漸增高，可增大20%左右，一小時后趨向平穩(wěn)，在1-6小時內(nèi)變化小于3%。這是由于血液與EDTA鹽抗凝劑混合后，血小板形狀由凹形變?yōu)榍蛐?，體積增大的原因。所以為了結(jié)果的準(zhǔn)確性，應(yīng)該在一小時后進(jìn)行測定。

我們監(jiān)護(hù)儀廠家發(fā)現(xiàn)用EDTA抗凝的末梢血也應(yīng)至少在15分鐘以后進(jìn)行測定，因為在這段時間內(nèi)有些標(biāo)本血小板暫時的聚集現(xiàn)象，使血小板計數(shù)假性減少，這不僅影響血小板其它指標(biāo)的準(zhǔn)確性，也造成白細(xì)胞計數(shù)有所增高。取血后立刻檢測，標(biāo)本的血小板和白細(xì)胞體積分布直方圖也是異常的，放置一段時間后再測定就可得到分布正常的直方圖。

7、溶血劑的用量及溶血時間

全自動血液分析儀可以控制溶血劑的加入量及溶血劑作用時間。但在使用半自動血細(xì)胞計數(shù)儀進(jìn)行血細(xì)胞計數(shù)時，需要在血液預(yù)稀釋后人工加入溶血劑，溶血以后再進(jìn)行血細(xì)胞計數(shù)和分類計數(shù)，正確掌握溶血劑用量及溶血時間非常重要。如果加入量不足或加入后放置時間過短，可以造成溶血不完全，使未溶解的紅細(xì)胞計入白細(xì)胞中，造成白細(xì)胞假性增加。溶血不完全也可影響血紅蛋白的準(zhǔn)確性。如果加入溶血劑量過多或放置時間太久白細(xì)胞明顯變形，使白細(xì)胞直方圖異常，白細(xì)胞分類計數(shù)結(jié)果不準(zhǔn)確，甚至不能進(jìn)行分類計數(shù)。

二、生理狀態(tài)及其它因素對實驗結(jié)果的影響

1、生理狀態(tài)

除很多病理情況下可引起血細(xì)胞計數(shù)的變化外，很多生理狀態(tài)也可以引起各項參數(shù)的變化。如妊娠的婦女和新生兒白細(xì)胞總數(shù)明顯增多；炎熱和寒冷常引起一過性白細(xì)胞總數(shù)增多；大量吸煙的人因血液一氧化碳增高其血紅蛋白含量可以明顯增加；每天不同時間白細(xì)胞總數(shù)也有一定差異。

2、儀器的影響

血液分析儀對環(huán)境要求較高，應(yīng)遠(yuǎn)離放射、核磁、放療加速器等大型醫(yī)療設(shè)備科室，以防止電信號的干擾。如果實驗室的電壓不穩(wěn)，應(yīng)安裝穩(wěn)壓裝置，防止儀器產(chǎn)生大量的電噪音，干擾血小板計數(shù)結(jié)果。

對一起的吸樣針、液體管道、計數(shù)池等應(yīng)定期用酶清洗劑或5%次氯酸鈉進(jìn)行徹底清洗，防止蛋白堆積。如果計數(shù)小孔周圍有蛋白堆積，可影響細(xì)胞體積測定，造成MCV增高。如果血紅蛋白比色池污濁可影響血紅蛋白定量結(jié)果。

3、試劑因素的影響

目前國內(nèi)有一些廠家能生產(chǎn)具有白細(xì)胞分類功能的血液分析儀。國外廠商均要求使用與其配套的稀釋液和溶血劑，甚至對清洗劑也有一定的要求，增加試驗成本。但是如果隨意改用其它廠家的試劑或使用自己配制的試劑，雖然對紅細(xì)胞、白細(xì)胞和血小板的計數(shù)不會有明顯的影響，但是對白細(xì)胞分類計數(shù)和細(xì)胞體積的測定的影響會很大，有些還會影響血紅蛋白的測定，使得多項血細(xì)胞分析指標(biāo)不準(zhǔn)確，如MCV、HCT、HGB、MCH、MCHC、RDW、MPV、PVT、PDW血細(xì)胞分類及其異常警告的提示等。

因為絕大多數(shù)血液分析儀采用電阻法進(jìn)行細(xì)胞計數(shù)和體積測定，原理是基于細(xì)胞在測試系統(tǒng)中產(chǎn)生的脈沖大小與儀器設(shè)定的閥值比較而得出的數(shù)據(jù)，脈沖大小除與細(xì)胞體積有關(guān)外，還與溶血劑的種類、稀釋液的滲透壓、離子強(qiáng)度、電導(dǎo)率、儀器出廠時固定的孔電壓和脈沖的增益率等有關(guān)。所以為得到準(zhǔn)確的結(jié)果，原則上應(yīng)使用原儀器的配套試劑。如果采用自配試劑測試，通過驗證，其所得的數(shù)據(jù)結(jié)果必須與用原裝試劑結(jié)果一直，而且各種細(xì)胞體積分布圖形也必須完全一致。